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用分光光度法粗測金黃色葡萄球菌菌懸液的濃度
發布時間:2016-06-12 點擊次數:3121次

 用分光光度法粗測金黃色葡萄球菌菌懸液的濃度

實驗目的:

    通過對同一菌液同時測吸光度值與平板菌落計數,將兩個結果做標準曲線。標準曲線做出后,通過測吸光度值間接反應菌懸液的濃度,用于指導菌懸液的制備。

實驗設備:可見分光环亚游戏

波長為600nm

實驗材料:空白對照液:0.9%無菌氯化鈉溶液

      稀釋液:0.9%無菌氯化鈉溶液

      營養肉湯培養基

實驗菌種:金黃色葡萄球菌(新鮮培養物)

實驗步驟:

1.將金黃色葡萄球菌的新鮮培養物接種至營養肉湯培養基中,在30~35℃恒溫培養箱中培養18~24h。

2. 在無菌陽性室按無菌操作將培養后的金黃色葡萄球菌用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋成不同濃度的菌懸液 。具體為分別吸取營養肉湯培養液0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml0.6ml0.7ml10ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中,稀釋成7種不同濃度的原始菌懸液。序號分別為1-7號。

2.1平板菌落計數法測活菌濃度

14個營養瓊脂培養基平板,分別從每個原始菌液中,取0.2ml的菌懸液,用平板涂布法,涂于平板中,標明序號,每個稀釋度涂2塊平板. 37培養箱培養72 h后,可見菌落形成,選取菌落數在30~300間的平板進行計數,每組稀釋度相同的平板取平均值作為菌落數計算出原菌液細菌濃度,作為細菌菌液的標準濃度。

2.2分光光度法測菌懸液吸收值

同時將以上5種原始菌液在波長為600nm下測定吸光度。用0.9%無菌氯化鈉溶液作為空白對照,記錄各原始菌液的吸光度值。

表一:平板菌落計數與吸光度值對比記錄

序號

吸取原培養液的量(ml---原始菌液

加樣到平板上的量(ml

稀釋倍數

 

平板計數菌落數(cfu

 

吸光度值

原始菌液的含菌量(cfu

1

0.1

0.2

5

 

 

0.018

 

2

0.2

0.2

5

 

 

0.029

 

3

0.3

0.2

5

 

 

0.049

 

4

0.4

0.2

5

 

 

0.058

 

5

0.5

0.2

5

 

 

0.076

 

6

0.6

0.2

5

 

 

0.082

 

7

0.7

0.2

5

 

 

0.102

 

結果計算

_2Y-^U ?

Ey­eiy{ ]9|Y8n'a5oa對同一菌液同時測吸光度值與進行平板菌落計數,將平板菌落計數所得菌液濃度作為細菌標準濃度c. 根據所測出A值以及相對應的標準濃度c值,作出標準曲線。

 

 


 

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